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在表达高水平VEGFR2的SYO-1细胞系中,无论是通过RTK阵列还是通过Westernblot分析,我们都无法检测到任何磷酸化的VEGFR2。AXL是一种特征良好的RTK,已被证实是在gist中伊马替尼耐药的结果。为了检测尼达尼布处理是否诱导AXL,我们进行了Westernblot分析。我们的结果表明,SYO-1细胞缺乏总水平和磷酸化的AXL水平。Westernblot检测显示CHP100细胞株存在AXL受体总量;然而,无论是否用尼达尼布处理细胞,都无法检测到磷酸化的AXL。接下来,我们想测试尼达尼布治疗是否导致非rtks的下调,如SRC家族激酶,一个已知的尼达尼布下游靶点。
根据phospho-SRCTyr416Westernblot分析,尼达尼布处理后并没有激活SRC家族激酶。尼达尼布治疗后SRC总水平未见变化。我们还使用non-RTKproteinprofilerarraykit(R&DSystems)对非rtk磷酸化进行了分析。在SYO-1和CHP100细胞系中,阵列检测到的大部分非rtks包括JNK、GSK3、、c-Jun、PRAS40和HSP60激酶。磷酸化FAK仅在SYO-1细胞系中检测到;然而,尼达尼布治疗后FAK的磷酸化没有明显变化。此外,在两种细胞系中,在SYO-1细胞系中,除了p53磷酸化外,未观察到任何非rtks磷酸化的主要变化。我们无法在非rtk阵列上检测到任何磷酸化的SRC。
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