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bismark 识别甲基化位点
2024-11-19 03:07

在中,根据甲基化的所处的上下文环境,分成以下3类;

bismark 识别甲基化位点

  1. CpG

  2. CHG

  3. CHH

代表磷酸二酯键,指的是甲基化的C的下游是1个碱基。代表除了碱基之外的其他碱基,即中的任意一种,代表甲基化的C下游的2个碱基是和, 表示甲基化的C下游的两个碱基都是。

bismark 识别甲基化位点

比对完之后,会生成1个bam 文件。使用命令可以从bam 文件中识别到甲基化的C,命令如下

bismark_methylation_extractor —comprehensive test/test_data_bismark_bt2.bam

只有1个参数,这个bam 文件是比对生成的bam文件,每个样本一个bam文件。

默认情况下,软件会自动根据两个因素生成结果文件

  1. 甲基化的C的类型就是前面提到的, , 3种类型

  2. 比对情况包括比对到四条链上, , , 4种情况所以会生成 3 X 4 = 12 个文件,对于链特异性文库来说,会生成3 X 2 = 6 个文件,这6个文件内容是类似的,都是记录了甲基化的C的染色体位置。

选项的作用就是在生成最终文件时,只考虑3种甲基化类型,将所有的比对情况进行合并,这样最终只会生成3个文件.

CpG_context_test_data_bismark_bt2.txtCHG_context_test_data_bismark_bt2.txtCHH_context_test_data_bismark_bt2.txt

以为例,内容如下:

Bismark methylation extractor version v0.19.0SRR15024317_length=86   -       1       57798691        zSRR15024319_length=86    +       2       10166600        ZSRR15024331_length=86  +       11      77736289        ZSRR15024338_length=86  +       3       197272186       Z

共5列,第一列为比对上的序列ID,第二列为基因组的正负链信息,第三列为染色体编号,第四列染色体上的位置,第5列为甲基化的C的状态。

不同字母表示不同的甲基化C:

X 代表CHG中甲基化的Cx  代笔CHG中非甲基化的CH 代表CHH中甲基化的Ch  代表CHH中非甲基化的CZ  代表CpG中甲基化的Cz  代表CpG中非甲基化的CU 代表其他情况的甲基化C(CN或者CHN)u  代表其他情况的非甲基化C (CN或者CHN)

对于, 采用字母的大小写来表征甲基化状态;对于, 采用字母的大小写来表征甲基化状态;对于, 采用字母 的大小写来表征甲基化状态。

上面的文件是methylation calling 最直接的证据,但是对于甲基化水平的定量来说,缺少了相关信息。运行时,除了生成上述文件之外,还会有下列3个文件

test_data_bismark_bt2_splitting_report.txttest_data_bismark_bt2.M-bias.txttest_data_bismark_bt2.M-bias_R1.png

记录了该样本甲基化的汇总信息

Final Cytosine Methylation ReportTotal number of C’s analysed:    40348Total methylated C’s in CpG context:    1365Total methylated C’s in CHG context:    21Total methylated C’s in CHH context:    103Total C to T conversions in CpG context:    678Total C to T conversions in CHG context:    10076Total C to T conversions in CHH context:    28105C methylated in CpG context:    66.8%C methylated in CHG context:    0.2%C methylated in CHH context:    0.4%

定义了每一个甲基化位点的详细信息,就是我们定量常用的beta 值部分文件内容如下

CpG contextposition        count methylated        count unmethylated      % methylation   coverage1       42      13      76.36   552       31      9       77.50   40

bismark 识别甲基化位点

双坐标轴图,左侧的纵轴代表甲基化比例,右侧的纵轴代表甲基化的数目,横坐标代表测序读长。

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